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分光光度計(jì)測(cè)定種公豬精液密度
更新時(shí)間:2018-10-09 點(diǎn)擊次數(shù):3263

操作步驟
1.1 打開(kāi) 721 型分光光度計(jì)電源開(kāi)關(guān)和比色皿室的箱蓋,使光電管在無(wú)光照情況下預(yù)熱 20 min。
1.2 旋轉(zhuǎn)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器,選擇 450 nm 為測(cè)定所需的單色光波長(zhǎng)。
1.3 選擇適當(dāng)?shù)撵`敏度,一般先將靈敏度旋鈕旋至低檔位。
1.4 調(diào) 0%:打開(kāi)比色皿室的箱蓋(關(guān)閉光門(mén)),用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)旋鈕使電表指針在通光度(T 值)
為 0%處。1.5 調(diào) 100%:在比色皿中加入豬精液稀釋劑溶液 4 mL,拉動(dòng)拉桿使其置于光路中,蓋上比色皿室箱蓋(打開(kāi)光門(mén)),調(diào)節(jié)光量調(diào)節(jié)旋鈕,使電表指針在 T 值為 100%處。

1.6 反復(fù)調(diào)節(jié)旋鈕,直到關(guān)閉光門(mén)和打開(kāi)光門(mén)時(shí)指針?lè)謩e指在 T 值為 0%和 100%處為止。

如果 T 值不能調(diào)節(jié)到 100%,就增大靈敏度,重新調(diào) 0%、100%。

1.7 待測(cè)溶液的配制:取比色皿一支(以容量為4 mL 比色皿為例),分別加入 3.6 mL 豬精液稀釋劑溶液,0.4 mL 豬原精液混勻,用擦鏡紙擦干比色皿透光面,使其光亮,無(wú)氣泡。1.8 將待測(cè)溶液置于比色皿并放入比色皿室中,蓋上箱蓋,拉動(dòng)拉桿將待測(cè)溶液置于光路中,此時(shí)從指針的位置讀得待測(cè)溶液的 T 值或吸光率(A 值)。T 值或吸光率(A 值)根據(jù)對(duì)照表讀取精液密度。

2 操作技巧
2.1 使用比色皿時(shí),只能拿毛玻璃的兩面,并且必須用擦鏡紙擦干透光面,以保護(hù)透光面不受損壞或產(chǎn)生斑痕。用比色皿裝液前必須用所裝溶液沖洗 3 次,避免改變?nèi)芤旱臐舛取?br />2.2 生豬精液取樣時(shí)應(yīng)取精液瓶中間的液樣。
2.3 生豬精液長(zhǎng)期放置會(huì)下沉到容器底部,因此,取樣時(shí)應(yīng)搖勻,測(cè)量時(shí)速度要快,讀數(shù)要準(zhǔn)。


3 計(jì)算方法

利用分光光度計(jì)測(cè)出 T 值后,根據(jù)對(duì)照表讀取精液密度(ρ),用于計(jì)算稀釋液的加入量和確定分裝瓶數(shù),計(jì)算公式如下:
Y=ρ×V×m×(1-n)÷35(億/瓶)

V1=Y×80(mL)

V2=V1-V0

注:ρ 為精液密度,V 為豬精液體積,m 為精子活力,n 為精子畸形率,Y 為瓶數(shù),V0 為采精量,V1 為豬精液稀釋后的體積,V2 為加入稀釋液的體積。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 25172-2010,精液產(chǎn)品中總精液數(shù)為 30~35 億個(gè)/瓶,每劑 80 mL。實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中,精子畸形率通過(guò)普通顯微鏡難以檢測(cè),因此,精子畸形率=0%,稀釋后精子活力與之前保持不變。

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