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紫外分光光度法測(cè)定牛樟芝子實(shí)體的總?cè)坪?/div>
更新時(shí)間:2018-10-18 點(diǎn)擊次數(shù):3025

牛樟芝(Antrodia camphorate T.T.Chang & W.N. Chou)是中國(guó)臺(tái)灣一種罕見的藥用真菌,屬擔(dān)子菌門菌 蔁綱無(wú)褶菌目多孔菌科薄孔菌屬,又名樟芝、樟菇、 牛樟菇、紅樟芝、血靈芝,牛樟芝生長(zhǎng)在中國(guó)臺(tái)灣*的 牛樟樹的內(nèi)部心材上。 牛樟樹僅在中國(guó)臺(tái)灣生長(zhǎng),主要 分布在海拔 450~2 000 m 的闊葉林中,生長(zhǎng)緩慢。 近年來(lái),人工培養(yǎng)牛樟芝逐漸興起,主要有椴木栽 培、液體培養(yǎng)、固體培養(yǎng)三種方法[1]。 牛樟芝活性成 分多種,其中已被鑒定的超過(guò) 200 種,主要有三萜、 多糖及糖蛋白、類固醇、木脂素、苯醌衍生物、馬來(lái) 酸和琥珀酸衍生物等[2]。 現(xiàn)代研究表明:牛樟芝具 有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、保肝、預(yù)防肝纖維化、神經(jīng) 保護(hù)、舒張血管、抗高血壓等作用[3]。 其中,三萜是 牛樟芝的主要活性成分之一,也是牛樟芝苦味的主 要來(lái)源,具有抗腫瘤、保肝、降血壓等作用[4]。 本研 究通過(guò)比色法測(cè)定人工培育牛樟芝子實(shí)體的總?cè)?萜含量,為牛樟芝子實(shí)體的開發(fā)利用提供一定的實(shí) 驗(yàn)依據(jù)。 1 儀器與材料 1.1 儀器 UV-1800 紫外可見分光光度計(jì);1.2 材料 熊果酸(純度≥98%,;香蘭素、高氯酸、冰 乙酸、甲醇均為分析純

2 方法與結(jié)果 2.1 牛樟芝醇提物的制備 牛樟芝子實(shí)體切片, 60℃干燥后粉碎,過(guò) 40 目篩,60 ℃干燥至恒重。 取 牛樟芝粉末 20 g, 加入 400 mL 95%乙醇回流提取3 次,過(guò)濾,濾液濃縮干燥即得牛樟芝的醇提物。 牛樟 芝醇提物平均得率為(35.47±0.15)%,RSD 為0.4%。 2.2 供試品溶液的制備 精密稱取牛樟芝醇提物 5 mg 加甲醇定容至 10 mL,配制成 0.5 mg/mL 的供 試品溶液。 2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取熊果酸 2.04 mg, 加甲醇定容至 10 mL,得 0.204 mg/mL 的熊果酸對(duì) 照品溶液。 精密量取 0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL 于試管中,水浴揮干,加 5%香草醛-冰乙酸溶液 0.2 mL、高氯酸 0.8 mL,60℃水浴 15 min,再冰水浴 5 min,加 5 mL 冰乙酸,搖勻后放置至室溫,于 510 nm 處測(cè)定吸光度。 以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性回歸方程:Y=4.16×10-2X- 7.85×10-2,r 值=0.999 1。 熊果酸在 3.4~27.2 μg/ mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 方法學(xué)考察 2.4.1 精密度 取濃度為 0.2 mg/mL 的對(duì)照品溶 液,按 2.3 下的方法進(jìn)行測(cè)定,平行 6 份,得 RSD 值 為 2.34%,表明儀器精密度良好。 2.4.2 重復(fù)性 取供試品 6 份,配制成 0.5 mg/mL 的待測(cè)溶液;取 600 μL 的供試品溶液,按 2.3 下的方法測(cè)定吸光度, 計(jì)算三萜含量,RSD 值為 3.3%, 表明重復(fù)性良好。 2.4.3 穩(wěn)定性 精密量取樣品,按 2.3 下的方法測(cè) 定吸光度,每 15 min 測(cè)定 1 次,在 2 h 內(nèi)顯色穩(wěn)定, RSD 值為 1.77%,表明待測(cè)樣品溶液在 2 h 內(nèi)穩(wěn)定。 2.4.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的供試品 6份,按照 1∶1 的比例加入一定量的對(duì)照品混勻,精密 吸取混勻后的供試品溶液, 按 2.3 下的方法測(cè)定吸 光度,計(jì)算加樣回收率和 RSD 值,結(jié)果見表 1。 計(jì)算 得平均加樣回收率為 102.0%,RSD 為 1.96%, 加樣 回收率范圍 99.40%~104.63%,表明該方法具有良 好的加樣回收率。

2.5 牛樟芝醇提物中總?cè)频暮繙y(cè)定 取牛樟 芝醇提物粉末 5 mg,定容至 10 mL,即得 0.5 mg/mL 的供試品溶液;取 600 μL 樣品溶液,按 2.3 下的操 作方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算醇提物中總?cè)频暮浚叫?3 份。 測(cè)得牛樟芝醇提物中總?cè)坪繛椋?9.40± 0.97)%,相當(dāng)于干品牛樟芝總?cè)坪繛?10.43%。 3 討 論 牛樟芝作為傳統(tǒng)藥物在中國(guó)臺(tái)灣民間用以解食物 中毒、解酒、保肝、治療腹瀉及皮膚瘙癢等癥[5]。 近 年來(lái)由于牛樟芝的人工培養(yǎng)技術(shù)日漸成熟, 迫切 需要建立牛樟芝的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),以為其開發(fā)利用 提供理論依據(jù)[6]。 三萜是牛樟芝子實(shí)體的重要活性成分之一,可 作為評(píng)價(jià)其質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。 本文以熊果酸作 為對(duì)照品,采用比色法對(duì)牛樟芝總?cè)坪窟M(jìn)行了 測(cè)定,結(jié)果表明牛樟芝中總?cè)坪扛哌_(dá) 10.43%。該方法測(cè)定三萜重復(fù)性好,可作為評(píng)價(jià)牛樟芝子實(shí) 體質(zhì)量的方法之一。 

 

 

 

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